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AxyPrep 血基因組DNA中量試劑盒
本試劑盒采用獨特的兩相分離技術，結合DNA制備膜選擇性地吸附DNA的方法達到純化基因組DNA的目的。適合從3 ml的抗凝人或哺乳動物全血獲得100 μg的基因組DNA，抗凝鳥類或兩棲動物全血中獲得多至120 μg的基因組DNA。
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本試劑盒采用獨特的兩相分離技術，結合DNA制備膜選擇性地吸附DNA的方法達到純化基因組DNA的目的。適合從3 ml的抗凝人或哺乳動物全血獲得100 μg的基因組DNA，抗凝鳥類或兩棲動物全血中獲得多至120 μg的基因組DNA。
一、試劑盒組成、貯存、穩定性
說明書，耗材：中量制備管、中量濾器、連接管、塑料扳手、中量管蓋。
Buffer VL：細胞和病毒裂解液，室溫密閉貯存。
Buffer G-B：蛋白沉淀液，室溫密閉貯存。
Buffer DV-A：Buffer DV 的制備液，請參照實驗準備Buffer DV 的配制方法配制，室溫密閉貯存。
Buffer DV：相分離液，室溫密閉貯存。
Buffer BV：DNA 結合液，室溫密閉貯存。
Buffer W1：洗滌液，室溫密閉貯存。
Buffer W2 concentrate：去鹽液。使用前，根據瓶上數量加入乙醇，混合均勻，室溫密閉貯存?？捎?00%乙醇或95%乙醇。
Eluent：2.5 mM Tris-HCl，pH 8.5，室溫密閉貯存。
二、注意事項
1. Buffer VL，Buffer BV 和Buffer W1 含刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套和眼鏡，避免沾染皮膚、眼睛和衣服，謹防吸入口鼻。若沾染皮膚、眼睛時，要立即用大量清水和生理鹽水沖洗，必要時尋求醫療咨詢。
2. 在按照此說明書操作前，請確保已做好足夠的對血傳播病毒的防護工作，按照正確方法處理體液和感染源。
3. 操作時嚴格按操作步驟進行，廢物必須放入含消毒液的廢物缸，并高壓滅菌。
三、實驗準備
1. 第一次使用時，在Buffer W2 concentrate 中按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇。
2. 準備無核酸和核酸酶污染的Tip 頭、離心管。
3. 制備Buffer DV：取2 ml Buffer DV-A, 125 ml 異丙醇，75 ml 異丁醇，加入提供的250 ml 試劑瓶中，混合均勻。
4. 4℃預冷Buffer DV。06/2 Ver.1
四、操作步驟
【DNA 釋放 】
1. 將3 ml 抗凝全血加入一50 ml 離心管中，若全血樣本體積不足3 ml，用PBS 補充至3 ml。v 2. 加入6 ml Buffer VL，蓋緊離心管帽，旋渦振蕩1 min。
3. 加入6 ml Buffer G-B，再次蓋緊離心管帽，立刻上下混勻。
【兩相分離去除蛋白和其它雜質】
4. 加入12 ml Buffer DV（4℃預冷），用力混合均勻。≥5,000×g 離心5 min。
* 請在實驗前按實驗準備中提供的方法準備Buffer DV。
5. 盡可能吸盡藍色上相，保留相間沉淀和下相。加入12 ml，4℃預冷Buffer DV，用力混合，≥5,000×g 離心5 min。
【基因組DNA 的純化】
6. 丟棄上相，將下相轉移至中量濾器中（濾器置于另一50 ml 離心管中），將活塞插入注射器，緩慢推動活塞，收集50 ml 離心管中的濾液。
* 上相必須完全棄盡。
* 如在轉移過程中下相沒有任何界面沉淀，步驟6 可以省略。
7. 棄濾器，在濾液中加入6 ml Buffer BV，混合均勻。
8. 將連結管插到負壓裝置的插口上，再將DNA 中量制備管插到連結管上。將步驟7 的混合液移到制備管中，開啟并調節負壓裝置至-20-30 英寸汞柱，吸盡管中液體。
9. 保持負壓，加入8 ml Buffer W1，吸盡管中液體。
10. 保持負壓，加入9 ml 已加入乙醇的Buffer W2，吸盡管中液體。
* 確認在Buffer W2 concentrate 中已按試劑瓶上的指定體積加入無水乙醇。
11. 用塑料扳手將中量制備管中的DNA 結合部分從負壓裝置轉移至另一潔凈的1.5 ml 離心管中，加入0.3 ml Buffer W2，蓋上中量制備管蓋后，12,000×g 離心2 min。
12. 將DNA 結合部分置于另一潔凈的1.5 ml 離心管中，在silica 膜中央加0.5 ml Eluent 或去離子水，蓋上中量制備管蓋后，室溫靜置2 min，12,000×g 離心1 min 洗脫DNA。
* 將去離子水或Eluent 加熱至65℃將提高洗脫效率。
13. 可選步驟：同樣方法，在silica 膜中央加0.25 ml Eluent 或去離子水，蓋上中量制備管蓋后，室溫靜置1 min，12,000×g 離心1 min 洗脫DNA。